產品名稱：大鼠孕酮(P)ELISA試劑盒

產品背景（僅供參考）：

大鼠孕酮（Progesterone, P）的生理功能與人類相似，主要參與生理周期調節、妊娠維持和胚胎發育等過程。由于大鼠是常用的實驗動物，研究其孕酮水平對生殖生物學、毒理學具有重要意義。

產品規格：48T，96T

檢測范圍：請見說明書。

靈敏度：最-低檢測濃度小于0.1。

特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

重復性：板內變異系數小于10% ，板間變異系數小于15%。

樣本類型：血清, 血漿 和其他生物液體。

保存溫度：2-8℃冷藏保存。

一、試劑盒組成：

免費代測服務，助力科研無憂！

在科研實驗中，ELISA試劑盒的選擇和使用對實驗結果至關重要。為了幫助您更高效、更精準地完成實驗，我們特別推出“ELISA試劑盒免費代測服務"，讓您無需擔心實驗操作和數據分析，專注于科研創新！

免費代測服務的優勢：

1、省時省力：您只需提供樣本，我們將為您完成實驗操作和數據分析，大幅縮短實驗周期，解放您的科研精力。

2、精準可靠：實驗全程在符合GLP標準的實驗室中進行，由經驗豐富的技術團隊操作，確保實驗結果的準確性和可重復性。

3、個性化定制：支持單樣本多指標檢測、大樣本高通量篩查，針對特殊樣本（如低豐度靶標、復雜基質）優化實驗方案，確保數據準確性和可溯性。

4、智能化報告：我們提供原始數據、標準曲線圖及統計學分析，支持多維度數據可視化，并可結合您的需求進行生物信息學深度解讀，為研究結論提供堅實支撐。

二、操作步驟：

1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL。

3. 樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

三、使用安全措施：

請務必穿戴好實驗服、防護面罩和實驗手套等，做好實驗防護。嚴禁直接接觸產品。剩余產品請勿隨意丟棄，請按照實驗室相關生物和化學廢棄物的處理規定，進行處理。

四、技術支持與售后服務：

如果您在使用中遇到任何問題，歡迎隨時聯系我們的技術支持團隊。我們提供7×24小時的咨詢服務，確保您在使用過程中無后顧之憂。

五、聯系我們：

如果您對我們的ELISA試劑盒或免費代測服務感興趣，歡迎隨時聯系我們網站客服，獲取專屬解決方案，開啟輕松高效的科研體驗！

選擇我們的ELISA試劑盒，讓專業的人做專業的事！我們都將以嚴謹的態度、高效的執行和可靠的成果，為您的科研之路保駕護航！

ELISA實驗中必看操作要點：

酶聯免疫吸附試驗（ELISA），因其操作簡單，靈敏度高，特異性好，經濟安全等特點而廣泛應用，但是由于其操作步驟復雜，一般包括試劑準備，樣本收集，加樣，溫育，洗滌，顯色，比色，結果判定等，其中任何一項操作不當都會對檢測結果產生很大影響。因此，必須加強ELISA檢測的全面質量控制，保證其結果的準確可靠。

1、試劑

優質的試劑是保證檢驗質量的基礎。從4℃冰箱取出的試劑必須放置室溫20～30min后再啟用，否則水化層的形成可能影響試劑的原始濃度及試劑中溶質分子的均勻分布。未用完的試劑和質控品應密封并及時放回冰箱保存。根據蛋白質在冷凍過程中出現蛋白分子分布改變的特點，試劑正式啟用前應充分混勻。所用蒸餾水、去離子水和自行配制的緩沖液等，都必須調整其pH值和離子強度等。不同批次的試劑在制作過程中很難保證質量完-全一致，因此必須選擇和訂購長批號的試劑，并保證保存條件，嚴格執行這一標準可以避免試劑批號改變而重建質控體系及重新評估試劑的復雜過程，并且能夠保證結果的穩定性。

2、標本

標本中有可能含有干擾試驗的免疫物質，導致假陽性或假陰性的結果，干擾因素一般可分為兩類，即內源性和外源性干擾因素。內源性干擾因素一般包括類風濕因子、補體、高濃度的非特異性免疫球蛋白、異嗜性抗體及某些自身抗體等，避免內源性干擾因素主要通過選擇合適的試劑；外源性干擾因素包括標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存時間過長及標本凝固等。要注意避免標本出現嚴重溶血，標本中血紅蛋白中含有血紅素基因，其具有類過氧化物的活性，因此，在以辣根過氧化物酶（HRP）為標記的ELISA測定試驗中，容易在溫育過程中吸附于固相，從而與加入的底物反應顯色。標本在低溫下保存時間過長，IgG可聚合成多聚體，在間接法ELISA測定中會導致本底加深，甚至出現假陽性結果。通常血清標本可在2～8℃保存1 周，冷凍保存時間會更長。血清標本應充分離心，否則可因纖維蛋白原非特異吸附于微孔而造成假陽性結果。冷凍保存標本避免反復凍融，標本的反復凍融會因其所產生的機械剪切力對標本中的蛋白等分子產生破壞作用，使抗體效價下降從而引起假陰性結果。標本的采集及分離要注意盡量避免細菌的污染。此外，標本在凍存時會因蛋白質局部濃縮分布不均，因此重新溶解的標本必須混勻，但不要劇烈振蕩和反復顛倒。

3、操作因素

3.1 加樣

加樣器是一種比較精密的工具，其在長時間使用時會因機械磨損或推動桿內附著的血痂等原因造成加樣不準，因此必須定期對加液器進行維護和校準。每次加不同的標本均需更換吸嘴，以免發生交叉污染；加樣速度不可太快，以免將標本加在孔壁上部，并注意不要濺出或產生氣泡，加樣時還應注意操作時差對結果的影響，尤其對競爭法檢測結果影響更大。因此建議在加酶結合物和底物時用多道加液器，或者雙人同時加樣以減少操作時差對結果的影響，另外有些項目在檢測前需要稀釋以減少非特異性反應。稀釋的方式非常重要，優良方式是采用振蕩器混勻，不可隨意改變混勻方式。

3.2 溫育

3.2.1溫育的溫度：育常采用的溫度有43 、37℃、室溫或4℃等。37℃是實驗室中常用的溫育溫度，也是大多數抗原抗體結合的最適反應溫度?？乖贵w反應一般在37℃經1～2 h 產物的生成可達頂-峰，為加速反應，可在一定范圍內提高反應的溫度并在反應過程中連續振蕩來增加抗原抗體接觸的概率?？乖贵w反應在4℃更為徹-底，形成的產物更多、更穩定，但因所需時間太長，在ELISA檢測中一般不予采用。

3.2.2溫育的方式：溫育方式常采用溫箱法、微波輻射法和水浴法。其中水浴法能較好解決因受熱不均衡所致的周圍孔與中央孔結果的吸光度差異（即“邊緣效應"）。可將ELISA板置于水浴箱中，板底應貼著水面，使溫度迅速平衡，為避免蒸發，可用塑料貼封紙覆蓋板孔。若用溫箱，ELISA板應放在濕盒內，濕盒要選用傳熱性良好的材料（如金屬等），在盒底墊濕的紗布，最后將ELISA板放在濕紗布上。溫育過程中每塊反應板不能重疊放置，防止溫度擴散的不均勻性。

3.3 洗滌

洗滌是ELISA不同于均相免疫學檢測技術的一大特征，洗滌在整個ELISA反應過程中雖不是一個反應步驟，卻非常關鍵。其目的是去除反應體系中與反應無關的成分，包括未結合的酶結合物以及反應過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質。洗滌液通常為含有一定濃度Tween 20 的緩沖液，Tween 20 是一種非離子去垢劑，既含親水基團，又含疏水基團，在洗滌中的作用機制是借助其疏水基團與經疏水性相互作用被動吸附于聚苯乙烯固相上蛋白分子的疏水基團形成疏水鍵，從而削弱蛋白分子與固相的吸附。同時在其親水基團與液相中水分子的結合作用下，促進蛋白質分子脫離固相而進入液相，最終被洗脫。必須注意非離子去垢劑的使用濃度，常用的洗滌液是含0.05 %Tween20，pH為中性的磷酸鹽緩沖液，如果洗滌液中的Tween20 超過0.2% ，可使包被于固相上的抗原抗體解吸附而影響實驗的測定下限。洗滌可采用洗板機或手工洗滌兩種方式，手工洗板則分為浸泡式和流水沖洗式洗滌。無論洗板方式如何，在向板內注液時應當避免氣泡殘留孔內，否則會因洗滌液難以進入孔中而影響洗滌效果。在采用洗板機洗板時，要保證洗板機上的每個吸液針都能一致地插入板孔底部將洗液完-全吸凈，要求洗板后殘液小于2μL，即人工扣板墊紙不濕，浸泡時間超過45s。

3.4 顯色

大多數情況下ELISA商品多選用HRP 和堿性磷酸酶（ALP）。HRP可催化的底物為過氧化氫，參加反應的顯色供氫體有鄰苯二胺（OPD）、鄰聯甲苯胺（OT）及四甲基聯苯胺（TMB）等。其中OPD 難溶于水，見光易變質，使用前配制，反應過程須避光且OPD有一定毒性。TMB 的反應產物為藍色，目視對比鮮明，其性質穩定，對人體無毒。若選用各類酸性終止液，則會使藍色轉變為黃色。TMB作底物時的產物檢測波長為450 nm ，ALP 作為標記物，其底物一般采用對硝基苯磷酸酯（pNPP），產物為黃色的對硝基酚，吸收波長是405 nm。為了保證結果的穩定性，必須要嚴格按照試劑盒說明書中規定的溫度和時間操作，不可隨意改變溫度和時間。

3.5 比色

ELISA 顯色結果必須通過酶標儀進行檢測，不可由肉眼判斷結果，因為不同個體的色覺存在差異，尤其是對于乙型肝炎病毒e抗體、乙型肝炎病毒核心抗體這樣的檢測項目，肉眼難以判斷。酶標儀應采用雙波長進行測定，包括對顏色產物敏感和不敏感的2個吸收峰波長，用非敏感波長清除由于容器上的劃痕、指印、背景等造成的干擾。TMB最大吸收波長為450nm ，非敏感波長為630nm ，一般不設空白孔，否則會出現吸光度值為負值的現象。加入終止液后應盡快比色，否則樣本吸光度值會逐漸下降，顯色越深下降越快，應在2 min 內比色。

3.6 應加強檢測儀器的質量控制

如定量移液器要定期校準；洗板機要及時傾倒廢液罐，補充洗滌液，開機后運行沖洗程序（雙蒸水），檢查系統液路系統（有無漏水），檢查吸液和注液速度，關機運行沖洗程序（雙蒸水），清洗吸針及水箱，儀器外觀清潔；酶標儀要定期檢查濾光片是否合格，光源是否穩定，機械系統是否有故障，保持外觀清潔，并定期請廠家工程師進行保養維修；水浴箱及存放試劑的冰箱要每天監測溫度，并有記錄等。

4、結果的判定
定量測定需要制備標準曲線，根據標準曲線計算結果。

綜上所述，ELISA檢測操作步驟復雜，可能會影響測定結果的因素較多，分布在測定操作的各個步驟中，因此必須加強各環節的質量控制，才能得到準確可靠的檢測結果。

大鼠孕酮(P)ELISA試劑盒

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